熒光素酶(Luciferase)是自然界中能夠產生生物發光的酶的統稱,常用包括:螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶等。熒光素酶的基因可以被合成并轉染到細胞中,將不同類型的細胞(骨髓干細胞、T細胞等)標記上(即表達)熒光素酶,就可以用高敏感度的CCD相機進行對細胞體內進行觀察而不會傷害到細胞。
主要應用
潛在啟動子/啟動子核心區域檢測
潛在miRNA對3-UTR等調控核心元件檢測。
實驗流程
雙熒光素酶報告驗證流程圖
1、重組質粒制備: 制備含有待檢測基因-Luc/Rluc的重組質粒;
2、細胞系選擇: 根據實驗需要選擇細胞株,通常選擇轉染效率較高的293T細胞或原代細胞等;
3、共轉染: 將帶有Luc/Rluc標記的報告基因和目的基因進行共轉染,設置不同的檢測時間點,一般為24h/48h;
4、外界干預: 轉染后,可進行物理/化學/病毒等的相應刺激;
5、細胞處理: 采用進口/國產雙熒光素酶檢測試劑盒依照protocol操作;
6、熒光檢測: 使用GENios Pro 酶標儀或具有類似檢測功能的設備進行熒光強度檢測。
客戶提供
基因模板,若無,我公司負責合成
研究的轉錄因子信息
預測的啟動子或miRNA序列信息及結合位點
美軒提供
1、測序結果
2、雙熒光素酶檢測結果